SECUAH 2018 > Pérez-Chávez and Fernández-Martínez 2018

dianas | Vol 7 No 1 | marzo 2018 | e201803a24

RAR-β, la nueva diana terapéutica para potenciar los efectos antitumorales del Cisplatino en cáncer de próstata.

Israel Pérez Chávez^a, Ana Belén Fernández Martínez^b

Facultad de Biología. Universidad Autónoma de Madrid. Darwin, 2. 28049 Canto Blanco, Madrid.

a. isradumbo@gmail.com; israel.perezc@estudiante.uam.es  b. anab.fernandez@uam.es 

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión de paneles

Palabras clave: cisplatino; RAR-β; PC-3; próstata; Le135; cáncer

Resumen

El cáncer de próstata se muestra como el cáncer de mayor incidencia en varones, además del segundo puesto en mortalidad. Encontrar nuevas formas de tratamiento es fundamental ya que durante las fases iniciales de la enfermedad nos encontramos con un tumor localizado, que puede ser extraído mediante prostatectomía y ablación de andrógenos reduciendo el tumor con gran efectividad. Sin embargo, a medida que avanza el tumor, este se extiende, y vuelve independiente de andrógenos. Esta fase cuenta con una alta peligrosidad debido a la inexistencia de tratamientos efectivos para la eliminación del cáncer. Por ello la línea celular estudiada en el presente trabajo es la línea PC-3, células independientes de andrógenos. Una posible aproximación es el uso del fármaco cisplatino un compuesto quimioterapéutico que provoca Cross-links de DNA y aductos impidiendo la transcripción y replicación del DNA, causando la muerte celular. El problema principal es que este fármaco causa nefrotoxicidad y neurotoxicidad entre otros efectos y que además, pierde efectividad en tratamientos sucesivos. Por ello, se propone el co-tratamiento con un antagonista de RAR-β, es decir, el receptor del ácido retinoico β. El ácido retinoico, cuenta entre sus funciones la de crecimiento y diferenciación celular, es regulado por distintos receptores nucleares como RAR y, junto con sus derivados, es utilizado como antineoplásico. Sin embargo; ¿Por qué usar un antagonista de uno de sus receptores, teniendo en cuenta su potencial como anticancerígeno? De las 5 isoformas descritas de RAR-β, a 4 se les asocia un papel oncogenético debido a su expresión aberrante en distintos tipos de cáncer. Por lo tanto, el uso de antagonistas de RAR-β podría ser un tratamiento efectivo que permitiría disminuir la dosis de cisplatino, y eliminar sus perjuicios. Para ello usamos un antagonista de RAR-β (Le135) además de un panantagonista de RAR (Le540) con el objetivo de estudiar la influencia de Le135 y cisplatino sobre la viabilidad celular, además del tratamiento conjunto. Para estudiar la viabilidad, se realizaron ensayos MTT, tinción con cristal violeta y tinción con DAPI. Se observó una disminución significativa de la viabilidad celular en el cotratamiento de Le135 con cisplatino, en comparación al cisplatino de manera individual, además no se observaron diferencias apreciables en la viabilidad con el tratamiento con Le540. La disposición de los microfilamentos de actina se analizó mediante una inmunofluorescencia de faloidina, observándose pérdida de simetría tras los tratamientos. Se estudió la capacidad proliferativa mediante una inmunofluorescencia con BrdU, observándose una disminución del número de células con cisplatino y una disminución del número de células y de células proliferativas con cisplatino + Le135. Por último, se analizó el posible mecanismo de inducción de muerte celular a través de una inmunofluorescencia anti-caspasa 3. No se observó marcaje de caspasa-3 en los tratamientos por lo que la muerte celular no se produce a través de esta vía.

SECUAH 2018 > Orea-Martínez etal 2018

dianas | Vol 7 No 1 | marzo 2018 | e201803a21

Silenciamiento epigenético de CLDN3 en células de cáncer de próstata resistentes a los tratamientos hormonales

María Jesús Orea Martínez^1,a, Ana González-Corpas¹, Begoña Colás¹, Javier Angulo², Santiago Ropero¹

1. Departamento de Biología de Sistemas. Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Departamento de Urología, Hospital Universitario de Getafe, Madrid, España. 

a. oreamariajesus@gmail.com 

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión

Palabras clave: Cáncer de próstata; receptor de andrógenos; modificaciones epigenéticas; CLDN3; bloqueo hormonal

Resumen

El cáncer de próstata es la segunda causa de muerte entre los hombres en los países desarrollados. La mayoría de los tumores de próstata son dependientes de andrógenos en el momento del diagnóstico, de ahí que uno de los tratamientos clásicos sea el bloqueo hormonal mediante la ablación androgénica. Aunque prolonga la supervivencia, la respuesta a estos tratamientos es limitada y de forma casi invariable los pacientes desarrollan resistencia al bloqueo hormonal continuado. Los cambios en las modificaciones epigenéticas juegan un papel decisivo en el desarrollo y progresión del cáncer, así como en el desarrollo de la resistencia de los tumores a los tratamientos convencionales. En este trabajo nos propusimos analizar el papel de la metilación del DNA en el desarrollo de resistencia de los tumores de próstata al bloqueo hormonal. La comparación de los datos obtenidos del array de metilación y del array de expresión nos proporcionó una lista de genes desregulados en LNCaP abl por cambios en el estado de metilación de su promotor: EGF, ELF5 y HYI se encuentran sobreexpresados por hipometilación de su región promotora y CLDN3, MARCKS y THBS1 presentan una disminución en su expresión por hipermetilación en su promotor. Nosotros hemos seleccionado CLDN3 para nuestro estudio porque codifica para una proteína implicada en las uniones estrechas entre células. La pérdida de expresión de CLDN3 en LNCaP abl está asociada con marcas de inhibición transcripcional en su región promotora (me3K27H3). En LNCaP encontramos marcas de activación transcripcional en la región promotora de CLDN3 (AcH3 y me3K4H3). Finalmente, hemos querido analizar la relevancia funcional en los cambios de expresión de CLDN3 en nuestro sistema celular, para ello realizamos ensayos de invasión en ambas líneas celulares, observando un incremento en el proceso de invasión en LNCaP abl. Para verificar este fenotipo decidimos inhibir la expresión de CLDN3 en LNCaP y repetir los experimentos, comprobando que la pérdida de expresión de CLDN3 incrementa la invasión, recuperando el fenotipo invasivo de LNCaP abl. Hemos identificado un grupo de genes cuya expresión está regulada por cambios en el estado de metilación de su región promotora en líneas celulares de cáncer de próstata que no responden a andrógenos y, cuyos cambios de expresión podrían tener un papel relevante en el desarrollo de tumores de próstata resistentes a los tratamientos hormonales. En particular el silenciamiento epigenético de CLDN3 puede tener un papel relevante en el desarrollo de CRPC.