SECUAH 2018 > Pérez-Chávez and Fernández-Martínez 2018

dianas | Vol 7 No 1 | marzo 2018 | e201803a24

RAR-β, la nueva diana terapéutica para potenciar los efectos antitumorales del Cisplatino en cáncer de próstata.

Israel Pérez Chávez^a, Ana Belén Fernández Martínez^b

Facultad de Biología. Universidad Autónoma de Madrid. Darwin, 2. 28049 Canto Blanco, Madrid.

a. isradumbo@gmail.com; israel.perezc@estudiante.uam.es  b. anab.fernandez@uam.es 

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión de paneles

Palabras clave: cisplatino; RAR-β; PC-3; próstata; Le135; cáncer

Resumen

El cáncer de próstata se muestra como el cáncer de mayor incidencia en varones, además del segundo puesto en mortalidad. Encontrar nuevas formas de tratamiento es fundamental ya que durante las fases iniciales de la enfermedad nos encontramos con un tumor localizado, que puede ser extraído mediante prostatectomía y ablación de andrógenos reduciendo el tumor con gran efectividad. Sin embargo, a medida que avanza el tumor, este se extiende, y vuelve independiente de andrógenos. Esta fase cuenta con una alta peligrosidad debido a la inexistencia de tratamientos efectivos para la eliminación del cáncer. Por ello la línea celular estudiada en el presente trabajo es la línea PC-3, células independientes de andrógenos. Una posible aproximación es el uso del fármaco cisplatino un compuesto quimioterapéutico que provoca Cross-links de DNA y aductos impidiendo la transcripción y replicación del DNA, causando la muerte celular. El problema principal es que este fármaco causa nefrotoxicidad y neurotoxicidad entre otros efectos y que además, pierde efectividad en tratamientos sucesivos. Por ello, se propone el co-tratamiento con un antagonista de RAR-β, es decir, el receptor del ácido retinoico β. El ácido retinoico, cuenta entre sus funciones la de crecimiento y diferenciación celular, es regulado por distintos receptores nucleares como RAR y, junto con sus derivados, es utilizado como antineoplásico. Sin embargo; ¿Por qué usar un antagonista de uno de sus receptores, teniendo en cuenta su potencial como anticancerígeno? De las 5 isoformas descritas de RAR-β, a 4 se les asocia un papel oncogenético debido a su expresión aberrante en distintos tipos de cáncer. Por lo tanto, el uso de antagonistas de RAR-β podría ser un tratamiento efectivo que permitiría disminuir la dosis de cisplatino, y eliminar sus perjuicios. Para ello usamos un antagonista de RAR-β (Le135) además de un panantagonista de RAR (Le540) con el objetivo de estudiar la influencia de Le135 y cisplatino sobre la viabilidad celular, además del tratamiento conjunto. Para estudiar la viabilidad, se realizaron ensayos MTT, tinción con cristal violeta y tinción con DAPI. Se observó una disminución significativa de la viabilidad celular en el cotratamiento de Le135 con cisplatino, en comparación al cisplatino de manera individual, además no se observaron diferencias apreciables en la viabilidad con el tratamiento con Le540. La disposición de los microfilamentos de actina se analizó mediante una inmunofluorescencia de faloidina, observándose pérdida de simetría tras los tratamientos. Se estudió la capacidad proliferativa mediante una inmunofluorescencia con BrdU, observándose una disminución del número de células con cisplatino y una disminución del número de células y de células proliferativas con cisplatino + Le135. Por último, se analizó el posible mecanismo de inducción de muerte celular a través de una inmunofluorescencia anti-caspasa 3. No se observó marcaje de caspasa-3 en los tratamientos por lo que la muerte celular no se produce a través de esta vía.

SECUAH 2018 > Orea-Martínez etal 2018

dianas | Vol 7 No 1 | marzo 2018 | e201803a21

Silenciamiento epigenético de CLDN3 en células de cáncer de próstata resistentes a los tratamientos hormonales

María Jesús Orea Martínez^1,a, Ana González-Corpas¹, Begoña Colás¹, Javier Angulo², Santiago Ropero¹

1. Departamento de Biología de Sistemas. Universidad de Alcalá, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.  2. Departamento de Urología, Hospital Universitario de Getafe, Madrid, España. 

a. oreamariajesus@gmail.com 

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión

Palabras clave: Cáncer de próstata; receptor de andrógenos; modificaciones epigenéticas; CLDN3; bloqueo hormonal

Resumen

El cáncer de próstata es la segunda causa de muerte entre los hombres en los países desarrollados. La mayoría de los tumores de próstata son dependientes de andrógenos en el momento del diagnóstico, de ahí que uno de los tratamientos clásicos sea el bloqueo hormonal mediante la ablación androgénica. Aunque prolonga la supervivencia, la respuesta a estos tratamientos es limitada y de forma casi invariable los pacientes desarrollan resistencia al bloqueo hormonal continuado. Los cambios en las modificaciones epigenéticas juegan un papel decisivo en el desarrollo y progresión del cáncer, así como en el desarrollo de la resistencia de los tumores a los tratamientos convencionales. En este trabajo nos propusimos analizar el papel de la metilación del DNA en el desarrollo de resistencia de los tumores de próstata al bloqueo hormonal. La comparación de los datos obtenidos del array de metilación y del array de expresión nos proporcionó una lista de genes desregulados en LNCaP abl por cambios en el estado de metilación de su promotor: EGF, ELF5 y HYI se encuentran sobreexpresados por hipometilación de su región promotora y CLDN3, MARCKS y THBS1 presentan una disminución en su expresión por hipermetilación en su promotor. Nosotros hemos seleccionado CLDN3 para nuestro estudio porque codifica para una proteína implicada en las uniones estrechas entre células. La pérdida de expresión de CLDN3 en LNCaP abl está asociada con marcas de inhibición transcripcional en su región promotora (me3K27H3). En LNCaP encontramos marcas de activación transcripcional en la región promotora de CLDN3 (AcH3 y me3K4H3). Finalmente, hemos querido analizar la relevancia funcional en los cambios de expresión de CLDN3 en nuestro sistema celular, para ello realizamos ensayos de invasión en ambas líneas celulares, observando un incremento en el proceso de invasión en LNCaP abl. Para verificar este fenotipo decidimos inhibir la expresión de CLDN3 en LNCaP y repetir los experimentos, comprobando que la pérdida de expresión de CLDN3 incrementa la invasión, recuperando el fenotipo invasivo de LNCaP abl. Hemos identificado un grupo de genes cuya expresión está regulada por cambios en el estado de metilación de su región promotora en líneas celulares de cáncer de próstata que no responden a andrógenos y, cuyos cambios de expresión podrían tener un papel relevante en el desarrollo de tumores de próstata resistentes a los tratamientos hormonales. En particular el silenciamiento epigenético de CLDN3 puede tener un papel relevante en el desarrollo de CRPC.

SECUAH 2018 > Segovia etal 2018

dianas | Vol 7 No 1 | 2018 | e201803

Inhibition of a G9a-Ezh2 network triggers an immune-mediated bladder cancer regression.

Cristina Segovia, Edurne San José-Enériz, Monica Martínez-Fernández, Ester Munera-Maravilla, Leire Garate, Estíbaliz Miranda, Iris Lodewijk, Carolina Rubio, Carmen Segrelles, Obdulia Rabal, Noelia Casares, Alejandra Bernardini, José A Casado, Marta Dueñas, Felipe Villacampa, Juan José Lasarte, Felix Guerrero, Guillermo de Velasco, Julen Oyarzabal, Daniel Castellano, Xabier Aguirre, Felipe Prósper, Jesús M. Paramio

CIEMAT

crismaitia@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2017.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión

Abstract

Bladder cancer (BC) represents the 7th most common cancer in men and the 17th in women. At diagnoses, approximately 75% of patients present with a non-muscle invasive disease (NMIBC) and the remaining 25% of the patients showed muscle-invasive cancer (MIBC). This pathology classification determines the treatment. NMIBC are treated by transurethral resection, which can be followed by intravesical instillation with BCG or mytomycin. However, a large proportion of NMIBC show a high rate of recurrence and, in some cases, these recurrences display increased aggressiveness progressing to MIBC. The current therapeutic options of MIBC include radical cystectomy, and cisplatin-based chemotherapy with poor clinical results. In a high proportion of the cases, the disease progress showing metastatic spreading, accounting for an extremely low survival. Moreover, an important fraction of the MIBC patients presents severe comorbidities due to other pathological conditions being considered ineligible for chemotherapy with few or no therapeutic alternatives. Recently, immune checkpoint inhibitors, based on PD-1 or PDL1 blockade, have demonstrated promising results in advanced BC patients. However, the number of patients that may benefit from these therapies is still limited, as a relevant fraction does not show objective responses accounting for only partial overall survival increase. Consequently, there is a need of new avenues in advanced BC management. The molecular landscape of BC has identified multiple alterations in genes governing chromatin organization and histone modifications. The epigenomic profiles correlate with the clinical outcome indicating possible therapeutic options for patients. Regarding the chromatin-remodeler genes, the involvement of EZH2 has gained relevance in the last years, due to its implication in multiple malignancies, especially in BC. EZH2 is a histone methyltransferase that regulates gene silencing through H3K27me3 marks. G9a is another histone-methyltransferase generating H3K9me2. In addition G9a can also monomethylate H3K27 thus priming for EZH2 activity. Moreover G9a and EZH2 interact in vivo and in vitro to modulate specific gene silencing through specific genomic recruitment to a subset of target genes. However the possible roles of G9A in BC have not been elucidated. Here we report that increased expression of G9a is characteristic of BC cases in association with poor clinical outcome of bladder cancer patient. This opens the possibility that G9a inhibitors can be of benefit in the management of BC. We show that a recently described G9a/DNMT dual inhibitor (CM272) is active in BC cells in vitro and in vivo. Moreover, we also demonstrate a synergistic effect of this inhibitor with cisplatin, the current chemotherapeutic for advanced bladder cancer, in vitro and in vivo. Remarkably, in a transgenic mouse model of metastatic bladder cancer, based on the simultaneous deletion of various tumor suppressor genes in urothelial cells, the combined treatment resulted in almost complete tumor and metastasis eradication mainly through activation of immune system. These findings, support new and promising opportunities for the therapy of bladder cancer.