SECUAH 2018 > Lucas-Romero and López-García 2018

dianas | Vol 7 No 1 | 2018 | e201803b31

Actividad espontánea en el asta dorsal de la médula espinal y sus mecanismos subyacentes

Javier Lucas-Romero, José Antonio López-García

Departamento de Biología de Sistemas UAH, Edificio de Medicina, Universidad de Alcalá, Campus Universitario, 28871 Alcalá de Henares, Madrid, España.

javierdelucas7@hotmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión

Palabras clave: asta dorsal; actividad espontánea; matrices de microelectrodos; neuronas marcapasos; corriente Ih; corriente persistente de sodio

Resumen

Las láminas superficiales de la médula espinal constituyen el primer punto de relevo y procesamiento de la información nociceptiva. La mayoría de las neuronas que aquí se encuentran son interneuronas de circuito local, algunas de las cuales disparan de manera espontánea con unos patrones característicos. Es probable que cada patrón esté mediado por corrientes iónicas específicas. Estos patrones pueden constituir un elemento clave en el código neural, que puede cambiar en situación de dolor crónico. Utilizando una rodaja longitudinal de médula espinal in vitro se han registrado mediante matrices de microelectrodos (MEAs) neuronas en láminas superficiales que presentaban actividad espontánea. Asimismo, se evaluó el posible automatismo de los patrones de disparo y la participación de la corriente Ih y la corriente persistente de sodio en el mantenimiento de alguno de estos ritmos. Las neuronas se clasificaron en función de su patrón de actividad espontánea (dependiendo de su regularidad, presencia o no de ráfagas y frecuencia de disparo). Se observó que las neuronas con un patrón regular son particularmente resistentes al bloqueo sináptico. Esto parece indicar que dichos patrones de disparo tienen un importante componente intrínseco. Además, el bloqueo específico de la corriente Ih y de la corriente persistente de sodio produjo una inhibición completa de la actividad espontanea en muchas de estas neuronas, indicando un papel relevante de estas conductancias en el mantenimiento de los ritmos intrínsecos.

SECUAH 2018 > Asenjo-Bueno etal 2018

dianas | Vol 7 No 1 | 2018 | e201803b11

Efecto de la hiperfosfatemia en la génesis de fibrosis vascular en el envejecimiento

Ana Asenjo-Bueno^1,a, Patricia Sosa², Elena Alcalde-Estévez², Lucía Serrano-García¹, Patricia Plaza¹, Diego Rodríguez-Puyol^2,3,4, Gemma Olmos^1,3,4, María Piedad Ruíz-Torres^2,3,4, Susana López-Ongil^1,3,4

1. Servicio de Nefrología y Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Príncipe de Asturias, Alcalá de Henares, España.  2. Departamento de Biología de Sistemas, Universidad de Alcalá, Alcalá de Henares, España.  3. Red Renal (REDinREN), Instituto de Salud Carlos III, Madrid, España.  4. Instituto Reina Sofía de Investigación Renal (IRISIN), Madrid, España. 

a. luaasbu19@gmail.com 

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión

Palabras clave: envejecimiento; hiperfosfatemia; fibrosis vascular; ROS, TGF-β; fibronectina..

Resumen

INTRODUCCIÓN Y OBJETIVO. La hiperfosfatemia aparece secundariamente en los pacientes con enfermedad renal crónica, que presentan complicaciones cardiovasculares asociadas a mayor mortalidad y signos de envejecimiento prematuro. Este estudio plantea establecer la relación entre hiperfosfatemia, envejecimiento y eventos cardiovasculares, evaluando concretamente el desarrollo de fibrosis vascular. MATERIALES Y METODOS. Para ello, se tratan dos tipos celulares básicos en la estructura vascular, células endoteliales (CE) y células musculares lisas (CML) humanas con un donador de fosfato llamado beta-glicerofosfato (BGP), a distintos tiempos. La producción de ROS se analizó por microscopia confocal mediante una sonda fluorescente CellROX. Para los estudios in vivo se utilizaron ratones C57/BL6 jóvenes de 5 meses y viejos de 24 meses. La fibrosis se estudió por la expresión de TGF-ß y fibronectina-1 (FN) por western blot, tanto en células como en tejidos vasculares, y por la tinción de rojo sirio en tejidos. Los niveles de fósforo séricos en ratones fueron determinados por métodos colorimétricos. RESULTADOS. El tratamiento con BGP en CE y CML indujo un aumento en ambas proteínas fibróticas, TGF-ß y FN. Además, se comprobó que el BGP era capaz de aumentar la producción de radicales libres (ROS) a tiempos cortos. Así mismo, se pudo observar que el antioxidante N-Acetil cisteina (NAC) bloqueó los efectos del BGP, sugiriendo que los ROS estaban implicados en la fibrosis inducida por BGP en las células. Se realizaron estudios in vivo en ratones jóvenes y viejos para corroborar los resultados encontrados in Vitro. Los ratones viejos poseían niveles mayores de fósforo sérico respecto a los jóvenes. En general, los ratones viejos presentan mayor grado de fibrosis en diferentes tejidos vasculares como aorta, pulmón y corazón; que fue medida mediante expresión proteica de FN, TGF-ß y por tinción de las fibras de colágeno con Rojo Sirio. DISCUSION. En resumen, podemos concluir que existe una relación entre el envejecimiento y la hiperfosfatemia, siendo ésta una de las posibles causas del desarrollo de fibrosis vascular. Uno de los mecanismos implicados podría ser la mayor producción de ROS por parte del BGP, pero más estudios son necesarios.

SECUAH 2018 > Alcalde-Estévez etal 2018

dianas | Vol 7 No 1 | 2018 | e201803b13

La endotelina 1 induce fibrosis en células de músculo estriado de ratón

Elena Alcalde Estévez^1,a, Ana Asenjo-Bueno², Patricia Sosa¹, Patricia Plaza², Lucía Serrano², Diego Rodríguez-Puyol^2,3,4, Gemma Olmos^1,3,4, María Piedad Ruíz-Torres^1,3,4, Susana López-Ongil^2,3,4

1. Departamento de Biología de Sistemas, Universidad de Alcalá, Alcalá de Henares, España.  2. Servicio de Nefrología y Fundación para la Investigación Biomédica del Hospital Universitario Príncipe de Asturias, Alcalá de Henares, España.  3. Red Renal (REDinREN), Instituto de Salud Carlos III, Madrid, España.  4. Instituto Reina Sofía de Investigación Renal (IRISIN), Madrid, España. 

a. elena_22_93@hotmail.com 

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión

Palabras clave: endotelina 1; receptor de endotelina A; fibrosis; músculo esquelético; mioblastos; radicales libres; envejecimiento

Resumen

INTRODUCCIÓN Y OBJETIVO: El envejecimiento se caracteriza por un decline progresivo de las funciones fisiológicas de varios órganos y sistemas. Durante este proceso fisiológico del organismo, se ve alterado el equilibrio de la liberación y/o actividad de las sustancias secretadas por el endotelio, entre las que se encuentra la endotelina 1 (ET-1). La ET-1 es el péptido vasoconstrictor más potente conocido hasta la fecha y se ha descrito que contribuye al desarrollo de fibrosis tisular en distintos tipos celulares. En resultados previos de nuestro grupo de investigación, se ha descrito un incremento de la presencia de fibrosis en el músculo estriado de ratones envejecidos, así como de los niveles de ET-1 circulantes en plasma, en comparación con sus controles jóvenes. Además, se demostró la presencia de receptores para la ET-1 en células murinas de músculo esquelético en cultivo. Por todo ello, el objetivo de este estudio es examinar si la ET-1 puede causar directamente fibrosis en células de músculo esquelético, analizando la expresión de factores fibrogénicos en el cultivo de mioblastos murinos. MATERIALES Y MÉTODOS: Se realizaron experimentos en mioblastos de ratón C2C12 en presencia y ausencia de ET-1 a diferentes tiempos, estudiándose su efecto sobre la expresión de proteínas fibróticas, así como los posibles mecanismos implicados en dicha expresión mediante la administración de diversos inhibidores. El desarrollo de fibrosis se analizó mediante la medición de proteínas fibróticas como fibronectina (FN) y el factor de crecimiento transformante beta (TGF-β) con las técnicas de western-blot, inmunofluorescencia, RT-qPCR y ELISA. RESULTADOS: La ET-1 induce fibrosis en mioblastos al aumentar la producción de TGF-β y de FN. Los ensayos con antagonistas específicos de los receptores de ET-1, ETA (BQ123) Y ETB (BQ788) confirmaron que el efecto de la ET-1 era mediado por la unión a su receptor ETA y no al receptor ETB. Está descrito que la ET-1 vía receptor ETA activa la vía PI3K-AKT-GSK, que interviene en distintas respuestas celulares. Con el fin de estudiar el mecanismo de acción de la ET-1 sobre la respuesta fibrótica en mioblastos, se demostró la participación de dicha vía mediante la administración de diferentes inhibidores farmacológicos de dicha vía. Además, también se comprobó el papel de la producción de radicales libres (ROS) inducida por ET-1 en la expresión de factores fibróticos mediante la incubación de mioblastos en presencia de antioxidantes (N-acetilcisteína y DPI), observándose que el desarrollo de fibrosis se veía reducido cuando se administraban dichos antioxidantes. DISCUSIÓN: Por tanto, podemos concluir que la ET-1 a través de su receptor ETA posee un efecto directo sobre fibrogénesis en el cultivo de mioblastos mediado por la vía de PI3K-AKT-GSK y la producción de radicales libres. Estos resultados nos sugieren que el aumento de la ET-1 circulante observado durante el envejecimiento sería uno de los factores que influyen en el desarrollo fibrosis en el músculo esquelético.