SECUAH 2018 > Sanmartín-Salinas etal 2018

dianas | Vol 7 No 1 | 2018 | e201803

El Substrato del receptor de Insulina-4 está sobreexpresado en el cáncer colorrectal y promueve la activación del ciclo celular a través de la vía Rb/E2F

Patricia Sanmartín Salinas, M. Val Toledo Lobo, Fernando Noguerales Fraguas, Miguel Toro Londoño, Antonio Jiménez Ruiz, Luis G. Guijarro

Universidad de Alcalá

patry.sanmartin@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión A1 – Cáncer
Premio a la mejor comunicación.

Resumen

INTRODUCCIÓN: El cáncer colorrectal (CCR) es la segunda causa de muerte relacionada con el cáncer y es el tumor maligno de mayor incidencia si tenemos en cuenta ambos sexos, en España [1]. El substrato del receptor de insulina 4 (IRS-4) es una proteína adaptadora muy poco estudiada y la hipótesis que relaciona su función con el desarrollo tumoral cada vez gana más fuerza [2]. MÉTODOS: Los estudios se llevaron a cabo in vitro (línea celular de cáncer de colon RKO) e in vivo, utilizando biopsias humanas de cáncer colorrectal (n=20) y tejido normal adyacente (n=20). Para analizar la expresión y localización del IRS-4 se usaron técnicas de inmunohistoquímica e inmunocitoquímica. Para estudiar el efecto de la sobreexpresión del IRS-4 y su papel en el ciclo celular, se llevó a cabo la construcción de un plásmido que incorporaba la secuencia codificante de dicha proteína. Se analizaron los efectos de la sobreexpresión del IRS-4 con y sin wortmanina y los resultados se evaluaron mediante inmunoprecipitación, fraccionamiento subcelular, western blot y qPCR. RESULTADOS: El tratamiento con dosis fisiológicas de IGF-1 produjo una translocación subcelular de IRS-4 desde el citoplasma hacia el núcleo en células RKO. La sobreexpresión de IRS-4 en dichas células dio lugar a un aumento de la proteína fosforilada del retinoblastoma (pRb Ser 809/811 y pRB Ser 705), así como de la expresión de E2F, ciclina E y ciclina D1, comparado con las células control. Algunos de estos cambios fueron parcialmente revertidos al tratar las células con wortmanina. En cuanto a los estudios realizados en las muestras de pacientes con CCR se observó mediante fraccionamiento subcelular una clara sobreexpresión de IRS-4 en el citoplasma, membrana y núcleo, mientras que los niveles de proteína fueron prácticamente indetectables en los tres compartimentos del tejido normal. Estudios inmunohistoquímicos mostraron una tinción nuclear positiva de IRS-4 en el 74% de las células tumorales, respecto a un 22% de células normales. La sobreexpresión de IRS-4 en las muestras de pacientes con CCR se correlacionó positivamente y de forma significativa con el incremento de varias proteínas importantes del ciclo celular para el control en el punto de restricción G1/S, como ciclina D1 (r = 0.6662), Rb (r = 0.7779), pRb serina 809/811 (r = 0.6864), pRb serina 705 (r = 0.6261) y E2F1 (r = 0.8702). CONCLUSIÓN: Nuestros resultados sugieren que el IRS-4 promueve la activación del ciclo celular a través de la activación de la vía Rb/E2F y podría servir como una diana farmacológica dada su sobreexpresión en el tejido tumoral y sus niveles apenas detectables en el tejido normal adyacente.1. Galceran J, Ameijide A, Carulla M, Mateos A, Quiros JR, Rojas D, et al. Cancer incidence in Spain, 2015. Clinical & translational oncology. 2017;19(7):799-825. 2. Sanmartin-Salinas P, Lobo M, Noguerales-Fraguas F, Londono MT, Jimenez-Ruiz A, Guijarro LG. Insulin receptor substrate-4 is overexpressed in colorectal cancer and promotes retinoblastoma-cyclin-dependent kinase activation. Journal of gastroenterology. 2018.

SECUAH 2018 > Madrigal-Martínez etal 2018

dianas | Vol 7 No 1 | 2018 | e201803

Prostaglandina E-2 intracelular activa los fenotipos tumorales en cáncer de próstata a través de la ciclooxigenasa-2

Antonio Madrigal Martínez, Ana Belen Fernández Martínez, Francisco Javier de Lucio Cazaña

antoniomadrigalmartinez@gmail.com

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión

Resumen

Ciclooxigenasa-2 (COX-2) es uno de los mediadores de la inflamación que juega un papel importante en la progresión del cáncer de próstata (CP), produce diferentes prostanoides, como la prostaglandina E2. Además, el factor inducible por hipoxia 1α (HIF-1α) juega un papel muy importante en CP, al inducir numerosos genes que contribuyen a la progresión del CP. Estudios previos de nuestro grupo de investigación, han demostrado que PGE2 intracelular (iPGE2) es capaz de activar diferentes fenotipos tumorales en células de CP y que existe una retroalimentación positiva COX-2-PGE2 que amplifica la señal inflamatoria iniciada por COX-2, ya que iPGE2 aumenta la expresión de COX-2 en células de CP. Nuestro objetivo es estudiar si iPGE2 activa los fenotipos de manera dependiente de COX-2 en una línea celular representativa de un estadio andrógeno-independiente de cáncer de próstata (PC3). Nuestros resultados muestran que iPGE2 disminuye la adhesión celular y aumenta la proliferación, migración e invasión celular, y aumenta la expresión de HIF-1α de forma dependiente de COX-2. Estos resultados sugieren que el aumento de expresión de COX-2 es fundamental para que iPGE2 active los diferentes fenotipos tumorales, contribuyendo a la progresión de CP.

SECUAH 2018 > Peña-Asensio etal 2018

dianas | Vol 7 No 1 | marzo 2018 | e201803

Bloqueo del miR-23a como estrategia restauradora de la respuesta celular T CD8+ específica contra antígenos asociados a hepatocarcinoma

Julia Peña Asensio, Elia Moreno-Cubero, Juan Ramón Larrubia Marfil

Hospital Universitario de Guadalajara

julia.pena@edu.uah.es

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2017.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión

Resumen

La presencia de células T CD8 específicas con actividad efectora adecuada es esencial para el reconocimiento y eliminación de células tumorales. Sin embargo, el tumor genera un microambiente local de citoquinas supresoras, encaminado a neutralizar la actividad anti-tumoral de la respuesta inmune adaptativa. El factor de crecimiento transformante β1 (TGF-β1) secretado por las células tumorales provoca cambios epigenéticos que inducen la inmunosupresión de las células T CD8 específicas contra antígenos asociados a hepatocarcinoma. TGF-β1 produce un aumento del miR-23a que, a su vez, bloquea la expresión del factor de transcripción BLIMP-1, lo que se traduce en una incorrecta diferenciación hacia célula efectora, caracterizada por disminución de granzima B e interferón (IFN)-γ, llevando a las células a un estado de agotamiento (fenotipo CD127-, PD-1+). El bloqueo in vitro de la acción de este miR-23a con el anti-miR apropiado permitirá la restauración de la actividad efectora tras el encuentro antigénico. Esta metodología podrá ser utilizada como estrategia para la transferencia de T CD8 específicos contra antígenos asociados a hepatocarcinoma (AAH-específicos) con capacidad efectora restaurada, lo que indudablemente podría impactar en la supervivencia de pacientes con hepatocarcinoma.

SECUAH 2018 > Arranz-Nicolás etal 2018

dianas | Vol 7 No 1 | marzo 2018 | e201803

DGKα inactivation is an integral component of the costimulatory pathway that amplifies TCR signals

Javier Arranz-Nicolás, Antonia Ávila-Flores,  Isabel Mérida

Centro Nacional de Biotecnología (CNB-CSIC)

jarranz@cnb.csic.es

III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018.
20-22 de marzo, 2018. Universidad de Alcalá. Alcalá de Henares, Madrid. España.
Sesión

Abstract

The arsenal of cancer therapies has evolved to target T lymphocytes and restore their capacity to destroy tumor cells. T cells rely on diacylglycerol (DAG) to carry out their functions. DAG availability and signaling are regulated by the enzymes diacylglycerol kinase (DGK) and , whose excess function drives T cells into hyporesponsive states. Targeting DGK is a promising strategy for coping with cancer; its blockade could reinstate T cell attack on tumors while limiting tumor growth, due to positive DGK functions in several oncogenic pathways. Here we made a side-by-side comparison of the effects of commercial pharmacological DGK inhibitors on T cell responses with those promoted by DGK and DGK genetic deletion or silencing. We show the specificity for DGK of DGK inhibitors I and II and the structurally similar compound ritanserin. Inhibitor treatment promoted Ras/ERK (extracellular signal-regulated kinase) signaling and AP-1 (Activator protein-1) transcription, facilitated DGK membrane localization, reduced the requirement for costimulation, and cooperated with enhanced activation following DGK silencing/deletion. DGKiII and ritanserin had similar effects on TCR proximal signaling, but ritanserin counteracted long-term T cell activation, an effect that was potentiated in DGK-/- cells. In contrast with enhanced activation triggered by pharmacological inhibition, DGK silencing/genetic deletion led to impaired Lck (lymphocyte-specific protein tyrosine kinase) activation and limited costimulation responses. Our results demonstrate that pharmacological inhibition of DGK downstream of the TCR provides a gain-of-function effect that amplifies the DAG-dependent signaling cascade, an ability that could be exploited therapeutically to reinvigorate T cells to attack tumors.