Objetivo: Encontrar una posible diana terapéutica para el tratamiento de la osteoporosis La osteoporosis es una patología caracterizada por la pérdida de densidad ósea. Esta enfermedad está asociada a una edad avanzada donde presenta una alta prevalencia. Además los costes asociados, tanto directos como indirectos, son elevados y se ha calculado que la incidencia de esta patología va a ir creciendo dado el envejecimiento de la sociedad. Considerando todo lo anterior y que los tratamientos actuales no curan la enfermedad sino que retrasan su avance, se requiere nuevos abordajes para tratar esta enfermedad. La osteoporosis se produce por un desequilibrio en la osteogénesis, proceso de formación de hueso. La vía Wnt está implicada en este proceso de tal forma que estimula la diferenciación de células madre mesenquimales en osteoblastos al mismo tiempo que inhibe la formación de osteoclastos. Chibby es un inhibidor de esta vía, por lo su inhibición se plantea como posible tratamiento de la osteoporosis. La mayoría de terapias actuales están dirigidas a la inhibición de la reabsorción excesiva de hueso mediada por los osteoclastos, mientras que mediante Chibby se conseguiría estimular la osteogénesis. A partir de una colección de unos 2 millones de moléculas se realizarán distintas técnicas de High throughout screening para buscar moléculas candidatas. Se realizará un primer cribado por calorimetría isoterma de titulación, en la cual se usarán Chibby y beta-catenina obtenidas de un sistema de expresión de células de insecto transfectadas con baculovirus con los genes de estas proteínas, así ver cuales de nuestras moléculas afectan a la unión y estabilidad de estas proteínas in vitro. Tras detectar posibles moléculas candidatas se realizará un secundo cribado para ver si esas moléculas afectan realmente a la expresión de genes regulada por beta-catenina in vivo, mediante un sistema de células eucariotas que presentan una construcción con el promotor de beta-catenina regulando la expresión de un gen reportero. En los últimos años han ido apareciendo nuevas terapias con anticuerpos basadas en bloquear inhibidores endógenos de la vía Wnt. Por lo tanto, una terapia combinada de bloqueo de estos inhibidores junto con otros inhibidores como Chibby podría estimular en última instancia la osteogénesis y contrarrestar el desequilibrio de la osteoporosis. No obstante, se sabe que la inhibición de Chibby podría generar efectos adversos como cáncer de colon o problemas en la función de los cilios de las vías respiratorios desencadenando patologías relacionadas. Por ello, la estrategia planteada es utilizar la dinámica del trasplante de médula ósea como procedimiento para introducir un futuro inhibidor de Chibby en la médula ósea y promover la osteogénesis.

La depresión es una enfermedad de gran importancia clínica y social. Su prevalencia a nivel mundial asciende a un 20% de la población. Según la Organización Mundial de la Salud, entre 1990 y 2013 el número de personas con depresión o ansiedad ha aumentado en cerca de un 50%, de 416 millones a 615 millones. Económicamente, la depresión y la ansiedad cuestan mundialmente 1 billón de dólares. Además, la inversión en el tratamiento de la depresión y la ansiedad tienen un rendimiento del 400%.
No se trata de una patología homogénea, sino más bien un fenómeno complejo con varios subtipos y probablemente más de una etiología. Entre las hipótesis causantes de la depresión se encuentran:

• Defectos en una o más etapas de la transmisión sináptica
• Hipótesis de las monoaminas. Se basa en la inhibición del sistema monoaminérgico, es decir, se aprecia un descenso en los neurotransmisores norepinefrina, serotonina (5-HT) y dopamina.
• Neurotrofinas y neurogénesis. La disminución en el volumen del hipocampo de numerosos pacientes apoya el papel de bajos niveles de factores neurotróficos en la depresión. Diversos estudios se han centrado en BDNF demostrando que varias formas de estrés disminuyen BDNF, mientras que el tratamiento crónico con antidepresivos aumenta los niveles de esta neurotrofina. De hecho, la inyección de BDNF en el hipocampo en modelos de ratón con depresión muestra efectos antidepresivos a largo plazo.

BDFN es un factor neurotrófico perteneciente a la familia NGF que está implicado en el desarrollo del sistema nervioso del embrión y en neuroprotección y sinaptogénesis en el sistema nervioso central del individuo adulto. BDNF lleva a cabo estas funciones a través de su unión al receptor de membrana TrkB, que conlleva a la activación de varias vías de señalización como PI3K-Akt, PLC-γ y la cascada MAP-quinasa de ERK. Alteraciones de esta señalización derivan en trastornos psiquiátricos como depresión, y además se ha comprobado que los antidepresivos aumentan la producción de BDNF por las neuronas y su señalización a través de TrkB. Es por ello que la búsqueda de agonistas de TrkB constituye una nueva estrategia terapéutica para abordar esta patología. Además, cuenta con la ventaja de que, a diferencia de los antidepresivos actuales, en este caso la señalización de este receptor se activa directamente e independientemente de la expresión, síntesis y secreción de BDNF.
En la búsqueda de estos agonistas hay que tener en cuenta la vía de señalización activada por la forma inmadura de BDNF, proBDNF, cuando se une al receptor p75NTR, puesto que desencadena un efecto totalmente opuesto al de la vía BDNF-TrkB. Por eso, en los ensayos HTS que se realizarán habrá un primer cribado para seleccionar moléculas que se unan a TrkB, y un segundo cribado donde se descartarán todas aquellas que se unan a p75NTR. En el primer cribado se medirá el aumento de los niveles intracelulares de calcio para detectar la activación de la vía BDNF-TrkB por los compuestos que sean activos en células HEK-293 que sobreexpresan TrkB y no expresan p75NTR. En el segundo cribado se medirán los niveles de caspasa-3 activa en células HEK-293 que sobreexpresan p75NTR y no expresan TrkB, de forma que aquellos compuestos que no produzcan aumentos de la actividad de esta enzima, serán los seleccionados puesto que se habrán unido a p75NTR. Por último, las moléculas seleccionadas se probarán con un BBB-test para evaluar así su capacidad de atravesar la barrera hematoencefálica.

El Alzheimer es una enfermedad neurodegenerativa del sistema nervioso central con etiología idiopática, caracterizada por una pérdida progresiva de la función intelectual. Las repercusiones económicas son muy importantes ya que es un proceso patológico crónico que genera incapacidad laboral, carga física y psíquica de los cuidadores y además requiere atención social y sanitaria [1]. El mecanismo molecular que por el cual se produce la patología del Alzheimer no está completamente esclarecido, aunque sí se sabe que se caracteriza por la formación intracelular de ovillos neurofibrilares (NFTs) de agregados de proteína tau hiperfosforilada en las células del sistema nervioso central y por la deposición extracelular de placas formadas por agregados de la proteína β-amiloide (Aβ), debido al mal procesamiento por parte de la enzima b-secretasa. Estos agregados junto con la presencia de tejido dañado en el cerebro producen una estimulación de la inflamación crónica, en la que interviene el receptor de membrana RAGE [2]. Puesto que se trata de una enfermedad multifactorial, para la que no existe un tratamiento farmacológico eficaz, solo paliativo, la estrategia que propone este trabajo es la búsqueda de un fármaco multidiana que actúe sobre dos de los componentes más relevantes en el desarrollo de la enfermedad: b-secretasa y el receptor RAGE [3]. De este modo, hipotetizamos que se conseguirá un efecto sinérgico, ya que se frenará el progreso de la enfermedad al reducir la deposición de beta-amiloides y se reducirá la inflamación, mejorando la función cognitiva. Para ello, se plantea la realización de un ensayo HTS, mediante la técnica de transferencia de energía de resonancia fluorescente (FRET), que permita el cribado sobre una quimioteca, con el fin de encontrar posibles compuestos candidatos a inhibir las dos dianas seleccionadas. Para evitar los posibles efectos adversos, sería necesario realizar diversos ensayos tanto de toxicidad hepática como sistémica así como establecer una óptima vía de administración y vehiculización.

1. Huang, Y., & Mucke, L. (2012). Alzheimer mechanisms and therapeutic strategies. Cell, 148(6), 1204-1222.
2. Shi, Z. M., Han, Y. W., Han, X. H., Zhang, K., Chang, Y. N., Hu, Z. M., ... & Hong, W. (2016). Upstream regulators and downstream effectors of NF-κB in Alzheimer's disease. Journal of the neurological sciences, 366, 127-134.
3. Chen, M., Wang, J., Jiang, J., Zheng, X., Justice, N. J., Wang, K., ... & Li, H. (2017). APP modulates KCC2 expression and function in hippocampal GABAergic inhibition. eLife, 6, e20142.

Outer membrane vesicles (OMVs) were recently described as a new type of secretion system. Moreover, it has been observed that some bacteria can secrete two different types of OMVs, one formed only by outer membrane and periplasmic components, and a second type that includes also inner membrane and cytoplasmic components [1,2]. This opens the field to the presence in these vesicles of cytoplasmic components such as sRNAs. Among the multiple functions of these sRNAs, one of them is the interference with host functions, as it has been described for the first time for an Escherichia coli sRNA acting on Caenorhabditis elegans [3]. Brucella species produce such OMVs, and our hypothesis is that they probably contain both types of vesicles. If so, they could contain sRNAs with the potential of interfering with the host. To test this we have isolated and visualized Brucella abortus 2308 OMVs and their content by different techniques such as confocal microscopy, flow cytometry and electron microscopy, using Shewanella vesiculosa M7^T to standardize all protocols. Our results indicate that the three methods are useful for different purposes, and thus complementary, although they need to be improved to fully demonstrate the presence or not of RNA in some of the OMVs.

1. Pérez-Cruz, C., Carrión, O., Delgado, L., Martinez, G., López-Iglesias, C., Mercade, E., 2013. New type of outer membrane vesicle produced by the Gram-negative bacterium Shewanella vesiculosa M7T: implications for DNA content. Appl. Environ. Microbiol. 79, 1874–1881.
2. Pérez-Cruz, C., Delgado, L., López-Iglesias, C., Mercade, E., 2015. Outer-Inner Membrane Vesicles Naturally Secreted by Gram-Negative Pathogenic Bacteria. PLOS ONE 10, e0116896.
3. Liu, H., Wang, X., Wang, H.-D., Wu, J., Ren, J., Meng, L., Wu, Q., Dong, H., Wu, J., Kao, T.-Y., Ge, Q., Wu, Z., Yuh, C.-H., Shan, G., 2012. Escherichia coli noncoding RNAs can affect gene expression and physiology of Caenorhabditis elegans. Nat Commun 3, 1073.

El cáncer de próstata constituye uno de los tumores más frecuentes en la actualidad para el que apenas existen opciones terapéuticas en las fases más avanzadas, por lo que la investigación de los mecanismos moleculares que determinan su aparición y desarrollo resulta de especial interés. En la búsqueda de compuestos naturales que permitan la prevención y tratamiento de la enfermedad, en los últimos años ha alcanzado especial relevancia el resveratrol, un polifenol presente en las uvas del que ya han sido reportados sus efectos en este tipo de cáncer. El objetivo de nuestro trabajo ha sido ahondar en el estudio del mecanismo de acción de dicho compuesto en células de cáncer de próstata. Nuestros resultados indican que el tratamiento con resveratrol regula la activación del factor NF-κB, la proliferación y la viabilidad celular, así como la apoptosis. Por otra parte, basándonos en experimentos previos llevados a cabo en nuestro laboratorio, nos planteamos analizar el posible papel de la proteína DUSP1 sobre los efectos del resveratrol en nuestro sistema. Los resultados obtenidos demuestran que dicha proteína está involucrada en algunos de los efectos del polifenol observados en células de cáncer de próstata.